熒光分光光度計是用于掃描液相熒光標(biāo)記物所發(fā)出的熒光光譜的種儀器。其能提供包括激發(fā)光譜、發(fā)射光譜以及熒光強度、量子產(chǎn)率、熒光壽命、熒光偏振等許多物理參數(shù)，從各個角度反映了分子的成鍵和結(jié)構(gòu)情況。通過對這些參數(shù)的測定, 不但可以做般的定量分析,而且還可以推斷分子在各種環(huán)境下的構(gòu)象變化,從而闡明分子結(jié)構(gòu)與能之間的關(guān)系。熒光分光光度計的激發(fā)波長掃描范圍般是190~650nm，發(fā)射波長掃描范圍是200~800nm。可用于液體、固體樣品（如凝膠條）的光譜掃描。

　　熒光光譜法具有靈敏度、選擇性強、用樣量少、方法簡便、作曲線線形范圍寬等優(yōu)點，可以廣泛應(yīng)用于生命、學(xué)、藥學(xué)和藥理學(xué)、有機和無機化學(xué)等域。

作原理

物質(zhì)熒光的產(chǎn)生是由在通常狀況下處于基態(tài)的物質(zhì)分子吸收激發(fā)光后變?yōu)榧ぐl(fā)態(tài)， 這些處于激發(fā)態(tài)的分子是不穩(wěn)定的，在返回基態(tài)的過程中將分的能量又以光的形式放出，從而產(chǎn)生熒光。

　　不同物質(zhì)由于分子結(jié)構(gòu)的不同，其激發(fā)態(tài)能的分布具有各自不同的征，這種征反映在熒光上表現(xiàn)為各種物質(zhì)都有其征熒光激發(fā)和發(fā)射光譜；因此可以用熒光激發(fā)和發(fā)射光譜的不同來定性地行物質(zhì)的鑒定。

　　在溶液中，當(dāng)熒光物質(zhì)的濃度較低時，其熒光強度與該物質(zhì)的濃度通常有良好的正比關(guān)系，即IF=KC，利用這種關(guān)系可以行熒光物質(zhì)的定量分析，與紫外-可見分光光度法類似，熒光分析通常也采用標(biāo)準(zhǔn)曲線法行。

　　1． 熒光發(fā)射光譜

　　選擇某固定波長的光激發(fā)樣品，記錄樣品中產(chǎn)生的熒光發(fā)射強度與發(fā)射波長間的函數(shù)關(guān)系，即得熒光發(fā)射光譜。

　　2． 熒光激發(fā)光譜

　　選定某熒光發(fā)射波長記錄熒光發(fā)射強度作為激發(fā)光波長的函數(shù)，即得熒光激發(fā)光譜。

　　3．時間分辨；

　　可用于對混合物中光譜重疊但有壽命差異的組分行分辨并分別測量。

　　時間分辨熒光測定公式如下：

　　P(t) = P₀EXP (-t/τ)

　　式中P(t)：擬合數(shù)函數(shù)

　　P₀：強度取值

　　EXP：數(shù)運算符

　　t：時間取值

　　τ：熒光平均時間壽命